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渦旋混合器對小鼠宿醉頭痛指標的分析

返回列表 來源:未知 發布日期:2019-08-14 11:21【

中國酒文化源遠流長,酒在當今社會的各種交際活 動、社交場合更是不可或缺。但近年來研究顯示,國內外急 性酒精中毒發病率均呈上升趨勢,考慮其龐大群體,并且 容易成為多種急癥的誘發因素,故應予以重視。急性酒精 中毒是指在短時間內攝入大量酒精或含酒精飲料后出現 的中樞神經系統功能紊亂狀態,嚴重程度與飲酒速度、飲 酒量、血液酒精濃度及個體耐受性等有關,通常伴有頭痛、 頭暈和胃部不適等延續效應。



1 材料與方法

1.1 材料與試劑


同品牌不同勾調工藝的48°濃香型白酒(編號分別為 ①號、②號),主要理化成分見表1,由四川省綿陽市豐谷酒 業有限公司提供。



Balb/c小鼠(雄性,日齡(42~48 d),SPF級):北京維通 利華實驗動物有限技術公司(生產許可證號:SCXK(京) 2016-0011)。獨立通氣籠盒(individually ventilated cages, IVC)室飼養,環境溫度20~22 ℃,相對濕度60%~70%,由 四川大學華西公共衛生學院實驗動物中心提供(使用許可 證號:SYXK(川)2018-011)。



1.2 儀器與設備

7890B氣相色譜儀、7697A頂空進樣器:美國Agilent公 司;ECTM-WAX毛細管色譜柱(30 m× 0.53 mm×1.2 μm):美 國Alltech公司;HeraeusTM FrescoTM 21微量離心機、Multiskan Go全波長酶標儀:美國Thermo Scientific公司;749540-0000 手持式勻漿器:美國Kimble公司;γ放射免疫計數器:安徽 中科中佳科學儀器有限公司;手動連續分液器:美國Gilson 公司;TS-1脫色搖床、XW-80A渦旋混合器:海門市其林貝爾儀器制造有限公司;隔水式電熱恒溫培養箱:上海躍進醫療器械廠;V型槽:自制。‘



1.3 方法

1.3.1 動物分組與處理


160只Balb/c小鼠適應性飼養后,按體質量進行分層隨 機分組,分為樣①組、樣②組、酒精對照組和空白對照組, 劑量設置見表2。




1.3.2 翻正反射實驗


禁食不禁水12 h,不同組別小鼠稱體質量后,分別按相 應劑量進行灌胃。參考CRABBE J C等方法,將小鼠背部 置于V型槽中呈仰位,30 s內未能翻轉身體,即翻正反射 消失,記錄醉酒時間(min);60 s內能連續2次翻轉身體,即 翻正反射恢復,記為醒酒時間(min);并計算醉酒率(%)。



1.3.3 標本采集與處理

當小鼠翻正反射恢復時,立即抓取固定使其眼球突出 充血,用彎頭眼科鑷迅速鉗取眼球,使血液流入抗凝離心 管中,顛倒混勻后4 ℃、3 000 r/min離心15 min,取上清, -20 ℃冰箱保存備測。不同的抗凝劑適用于不同的指標測 定,加入100 μL肝素鈉溶液的抗凝管用于乙醇、PGE2、HIS 含量測定;加入100 μL 1% EDTA、100 μL抑肽酶的抗凝管 用于ET、SP、MEK、CGRP含量測定。



1.3.4 指標檢測

血漿乙醇濃度測定:標本平衡至室溫后,取200 μL待 測標本加入頂空玻璃中,再加入2 mL超純水,蓋緊瓶蓋后 放于頂空進樣裝置中進行汽化平衡,自動進樣1 mL,氣相 色譜法檢測。色譜條件:ECTM-WAX毛細管色譜柱(30 m× 0.53 mm×1.2 μm);分流進樣,分流比10∶1;載氣:N(純度 2 99.999%),流速25 cm/s;氫火焰離子化檢測器:250 ℃;進 樣口溫度:200 ℃;程序升溫:40 ℃保留5 min,以20 ℃/min 升至200 ℃,保留7 min;頂空氣化條件:平衡時間30 min,加 熱溫度70 ℃,傳輸線溫度90 ℃,進樣針溫度70 ℃。



2 結果與分析

急性酒精中毒是指一次性過量飲酒所致的急性中毒, 常伴有頭痛、頭暈和胃部不適等延續效應。研究表明,當 乙醇暴露劑量超過3.5 g/kg,絕大多數小鼠均會出現翻正反 射消失的現象,故根據前期預實驗,本研究采用11 mL/kg 體質量(約4.2 g/kg)的單次灌胃劑量進行急性酒精中毒 模型建立。飲酒后,乙醇主要在胃腸道被吸收,約90%~98%的 乙醇通過肝臟進行代謝,代謝速率與攝入量、酶活性等相 關。飲酒后,乙醇主要在胃腸道被吸收,約90%~98%的 乙醇通過肝臟進行代謝,代謝速率與攝入量、酶活性等相 關。CGRP是血管周圍神經釋放的最主要的血管活性肽類 物質,是迄今已知最強的血管舒張肽,在偏頭痛的發病機 制中起著關鍵性作用。



3 結論

綜上所述,不同濃香型白酒對小鼠宿醉頭痛相關效應 指標的影響存在差異,其中酒樣①較酒樣②能誘導產生更 高的SP、MEK含量水平,結合白酒理化成分分析,提示可 能與酒樣中較高的總酸、乙醛、乙縮醛等微量成分有關。







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