1 材料

Trizol（Invitrogen）；熒光定量 PCR 儀（Thermo 公司）；普通 PCR 儀（杭州晶格科學儀器有限公司）； 逆 轉 錄 試 劑 盒（RevertAidTM first Strand cDNA Synthesis Kit）（Thermo 公司）；AMPKα2 試劑盒（北 京博奧森生物技術有限公司）；β-Actin（北京中杉）； Western- 抗 二 抗 去 除 液（Beyotime）；QuantiFast SyBr Green PCR kit（Qiagen）；引物合成（生工生物工程上海股份有限公司）；預染蛋白 Marker； VE-180 型電泳槽；VE-186 型轉膜儀（Tanon）；高速臺式冷凍離心機（安徽嘉文儀器裝備有限公 司）；EPS 300 型 電 泳 儀（Bioworld Tanon）；LX 300 型微量離心機（海門市其林貝爾儀器制造有限 公司）；PVDF 膜（Millipore）；電熱恒溫箱 DNP9052BS- Ⅲ（上海三發）；生物信號采集系統（成都 泰盟科技有限公司 BL-420S 生物機能實驗系統）。

2 方法

取梗死 區心肌組織 100 mg，放入添加 RIPA 細胞裂解液，冰 上勻漿，離心取上清液，BCA 試劑盒測量各組樣品 總蛋白濃度。將蛋白樣品與 5xSDS-PAGE 蛋白上樣緩 沖液均勻混合，熱水浴 5 min。經 SDS-PAGE 行凝膠 電泳，轉 PVDF 膜，加入 Western 封閉液室溫封閉 2 h。 參考說明書一抗 4 ℃孵育過夜，二抗孵育 2 h，洗膜 后置于暗室曝光、顯影，最后使用 Image J 軟件分析 顯影條帶，以目的蛋白與 GAP-DH 條帶灰度值比值 作為 AMPK 蛋白的相對表達量。采用 SPSS 18.0 進行統計學分析。連續型變量 以均數 ± 標準差（x ± s）表示，多組之間均數比較 采用單因素方差分析，方差齊時 2 組之間均數比較 采用SNK法，方差不齊時采用Dunnett法，以P ＜0.05 為差異具有統計學意義。

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