近年來，隨著腫瘤發(fā)病率和致死率的逐漸上升，對 于腫瘤的治療方法也有了新的研究進(jìn)展。免疫治療已 經(jīng)成為除了手術(shù)治療、放療、化療之外的第四大腫瘤治 療方法。免疫檢查點(diǎn)抑制: PD-1 / L1、CTLA-4 等已在黑 色素瘤、腎癌、肺癌等腫瘤中達(dá)到長期治療效果; 此外 CAＲ-T、TCＲ-T、腫瘤疫苗等免疫治療技術(shù)的基礎(chǔ)和臨床研究也逐漸成為焦點(diǎn)。

1 資料與方法

1． 1 對 象

選取 2018 年 7 月至 2018 年 10 月于山西省腫瘤 醫(yī)院體檢中心進(jìn)行常規(guī)體檢的健康成人共 1 238 例， 其中女性 855 例，男性 383 例，年齡 27 ～ 90 歲，平均 年齡 41． 67 歲，分為 3 個年齡段: 第一組: 年齡 ＜ 39 歲( n = 400) ; 第二組: 年齡 40 ～ 59 歲( n = 560) ; 第三 組: 年齡 ＞ 60 歲( n = 278) 。所有研究對象均滿足以下條件: 排除惡性腫瘤、自身免疫性、感染性及代謝性 疾病; 血細(xì)胞計(jì)數(shù)檢查以及肝、腎功能檢查均正常者; 排除激素類藥物及免疫調(diào)節(jié)劑使用史者; 排除非山西 籍健康成人。

1． 2 儀器及主要試劑

FASC CantoⅡ流式細(xì)胞儀、流式細(xì)胞儀校準(zhǔn)微球: 美國 Becton-Dickinson( BD) 公司生產(chǎn)。KDC-1044 低速 離心機(jī): 安徽中科中佳科學(xué)儀器有限公司生產(chǎn)。其林貝爾QL901渦旋振蕩器: 海門市其林貝爾儀器制造有限公司生 產(chǎn)。采用六色熒光標(biāo)記抗體，所采用的抗體包括: CD3 -FITC /CD16 + 56-PE / CD45- PerCP-Cy 5． 5 /CD4-PC7 / CD19-APC /CD8-APC-Cy7、流式細(xì)胞儀用紅細(xì)胞裂解液 與絕對計(jì)數(shù)微球試劑盒: 北京同生時代生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)。

1． 3 實(shí)驗(yàn)方法

( 1) 使用熒光微球?qū)α魇郊?xì)胞儀進(jìn)行校準(zhǔn)，將流式 細(xì)胞儀調(diào)整至最佳工作狀態(tài)。
( 2) 檢測過程: 采用反向移液技術(shù)吸取 50μl 混勻 的 EDTA-K2 抗凝全血，加入絕對計(jì)數(shù)管底部，再加入 20μl 的六色熒光單克隆抗體，蓋上管帽，輕輕渦動混勻 3 秒鐘，室內(nèi)避光孵育 25 分鐘。向管內(nèi)加入 450μl 流 式細(xì)胞儀用溶血劑，蓋上管帽，輕輕渦動混勻 15 秒鐘， 室溫避光反應(yīng) 10 分鐘后上機(jī)檢測。全血標(biāo)本均要求 在早晨空腹 6∶ 30 ～ 7∶ 30 之間采集，采血后 24 小時內(nèi)完 成檢測。

1． 4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用 SPSS24． 0 軟件包。若服從正態(tài)分布，則用均 數(shù) ± 標(biāo)準(zhǔn)差( x 珋± s) ，x 珋± 1． 96S 計(jì)算95% 參考值范圍; 偏 態(tài)分布 以 中 位 數(shù) ± 四 分 位 間 距［M ( P25，P75) ］計(jì)算 95% 參考值范圍。正態(tài)分布數(shù)據(jù)兩組間均數(shù)比較采用 兩樣本 t 檢驗(yàn)，多組間均數(shù)比較采用方差齊性檢驗(yàn); 若 不服從正態(tài)分布，方差不齊，應(yīng)用非參數(shù)分析( Wilcoxon 秩和檢驗(yàn)) 對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。以 P ＜ 0． 05 認(rèn)為有 統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2． 1 成年人外周血 T 淋巴細(xì)胞亞群的參考值范圍

對 2018 年體檢的健康成年人( n = 1 238) 外周血淋 巴細(xì)胞亞群的 95% 參考值范圍進(jìn)行計(jì)算，可作為本實(shí) 驗(yàn)室正常參考值的參考范圍; 此外，分別將出不同性 別、不同年齡段的健康成年人 95% 參考值范圍進(jìn)行計(jì)算。

2． 2 不同性別健康成年人 T 淋巴細(xì)胞亞群的檢測結(jié)果比較

對不同性別之間，將女性( n = 855) 和男性( n = 383) 外周血淋巴細(xì)胞亞群進(jìn)行比較。可以看出，CD8 絕對計(jì)數(shù)、CD4 絕對計(jì)數(shù)和 CD19 絕對計(jì)數(shù)無顯著差異 ( P ＞ 0． 05) ; CD3 + T 細(xì)胞相對計(jì)數(shù)和絕對計(jì)數(shù)、CD4 + T 細(xì)胞相對計(jì)數(shù)、CD8 + T 細(xì)胞相對計(jì)數(shù)和絕對計(jì)數(shù)、NK 細(xì)胞相對計(jì)數(shù)和絕對計(jì)數(shù)、CD19 細(xì)胞相對計(jì)數(shù)均存在 差異性( P ＜ 0． 05) 。

2． 3 不同年齡組健康成年人 T 淋巴細(xì)胞亞群的檢測結(jié)果比較

對年齡 ＜ 39 歲( n = 400) 、40 ～ 59 歲( n = 560) 和年 齡 ＞ 60 歲( n = 278) 三個年齡段的外周血淋巴細(xì)胞亞群 進(jìn)行比較。可以看出，不同年齡段的 T 淋巴細(xì)胞亞群 均存在差異性( P ＜ 0． 05) ; 同時，對不年齡段的 T 淋巴 細(xì)胞亞群進(jìn)行兩兩比較。三個年齡組的 CD3 + T 細(xì)胞 相對計(jì)數(shù)和絕對計(jì)數(shù)均存在顯著性差異( P ＜ 0． 05) ，具 有統(tǒng)計(jì)學(xué)意 義，且 呈 下 降 趨 勢; 老 年 組( ≥60 歲) 的 CD4 + T 細(xì)胞相對計(jì)數(shù)和絕對計(jì)數(shù)、NK 細(xì)胞相對計(jì)數(shù)和 絕對計(jì)數(shù)、CD19 細(xì)胞相對計(jì)數(shù)和絕對計(jì)數(shù)與青年組 ( 27 ～ 39 歲) 、中年組( 40 ～ 59 歲) 均存在差異性( P ＜ 0． 05) ，除了 NK 細(xì)胞相對計(jì)數(shù)和絕對計(jì)數(shù)呈上升趨勢 外，CD3 + T 細(xì)胞相對計(jì)數(shù)和絕對計(jì)數(shù)、CD4 + T 細(xì)胞相 對計(jì)數(shù)和絕對計(jì)數(shù)、CD8 + T 細(xì)胞相對計(jì)數(shù)和絕對計(jì)數(shù)、 CD19 + T 細(xì)胞相對計(jì)數(shù)和絕對計(jì)數(shù)、CD4 /CD8 比值均 呈下降趨勢。

3 討 論

健康成年人流式細(xì)胞技術(shù)免疫表型分型的結(jié)果有 助于免疫缺陷病、腫瘤、白血病、淋巴瘤患者等進(jìn)行免 疫評估，但是采用流式細(xì)胞儀進(jìn)行免疫分析，尚未建立 普遍可接受的參考值范圍。T 淋巴細(xì)胞的正常參考 值范圍不僅具有年齡、性別、種族、地域等差異，還有可 能受到吸煙、飲酒、感染、懷孕等各種因素的影響，考慮到各個實(shí)驗(yàn)室間的差異，現(xiàn)在建議在許多國家進(jìn)行 以人口為基礎(chǔ)的研究，并對單個實(shí)驗(yàn)室的參考值范圍 進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化。因此，在健康成人中，根據(jù)年齡和性別確 定淋巴細(xì)胞參考值范圍對于評估患者結(jié)果非常重要。



 

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