噻呋酰胺又叫噻氟菌胺(thifluzamide),屬于噻唑酰胺類殺菌劑,具有強(qiáng)內(nèi)吸傳導(dǎo)性和長(zhǎng)持效性?它是含噻唑環(huán)的苯基酰胺化合物,可防治多種作物病害,廣泛應(yīng)用于水稻?麥類?花生?棉花?甜菜?咖啡?馬鈴薯?草坪等多種作物m?目前尚不能査詢到噻呋酰胺在花生作物中的最大殘留限量(maximumresiduelimit,MRL)值,我國(guó)GB2763-2016規(guī)定噻呋酰胺在稻谷中的MRL值為7mg/kg,在糙米中的MRL值為3mg/kg,馬鈴薯為2mg/kg,日本肯定列表規(guī)定噻呋酰胺在糙米中的MRL值為1mg/kg,馬鈴薯為0.05mg/kg?膳食風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估時(shí),花生及花生油均歸類為植物油進(jìn)行評(píng)估,日膳食量按0.0327kg計(jì)算?目前國(guó)內(nèi)外關(guān)于噻呋酰胺的檢測(cè)方法多種多樣,使用較多的是氣相色譜法和髙效液相色譜法其檢測(cè)方法容易受到雜質(zhì)干擾,選擇性差,近年來(lái),靈敏度高?選擇性強(qiáng)的高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)被用于噻呋酰胺的殘留檢測(cè),但其檢測(cè)方式多是以負(fù)離子掃描模式為主,在實(shí)際的農(nóng)殘分析時(shí)存在一定的局限性,靈敏度通常不如正離子掃描模式髙?本研究經(jīng)過對(duì)前處理過程和儀器的調(diào)節(jié)優(yōu)化,建立了在電噴霧正離子模式下,采用超髙效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀(ultraperformanceliquidchromatography-tandemmassspectrometer,UPLC-MS/MS)多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(multiplereactionmonitoring,MRM)模式,檢測(cè)噻咲酰胺在花生中的殘留的分析方法?樣品經(jīng)乙腈提取,QuEChERS方法凈化,采用基質(zhì)匹配外標(biāo)法定量測(cè)定,以期為膳食風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估工作打下基礎(chǔ)?

WatersHclass超高效液相色譜(美國(guó)Waters公司);UPLC/XevoTQ-S三重四極桿質(zhì)譜儀(配電噴霧離子源,美國(guó)Waters公司);CK2000高通量組織研磨儀(托摩根生物科技有限公司);Laborota4000eficient旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(德國(guó)Heidolph公司);Milli-Q超純水儀(美國(guó)Millipore公司);QL-901旋渦混合器(江蘇海門其林貝爾儀器制造有限公司)?乙腈(分析純,天津市康科德科技有限公司);乙腈?甲酸(色譜純,美國(guó)Fisher公司);無(wú)水硫酸鎂(MgS04,天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司);N-丙基乙二胺(primarysecondaryamine,PSA)?石墨炭黑(graphitecarbonblack,GCB)(上海安譜公司)?240g/L噻呋酰胺懸浮劑和噻呋酰胺農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品(純度&96.0%,合肥星宇化學(xué)有限責(zé)任公司)?分別稱取標(biāo)準(zhǔn)品各5.00mg于50mL棕色容量瓶中,用乙腈溶解并定容至刻度,配制成濃度為100Hg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液,于4°C條件下保存?分別吸取上述標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液各0.5mL于50mL容量瓶,用乙腈定容至刻度,制成濃度為1jxg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液?

240g/L噻呋酰胺懸浮劑,設(shè)2個(gè)施藥劑量:低劑量為150ga.i./ha,高劑量為225ga.i./ha?各設(shè)1次?2次施藥,施藥間隔期7d,每處理設(shè)3次重復(fù)?用隨機(jī)法采集距末次施藥后14?21?28d的花生植株?土壤?花生殼和花生仁樣品?另設(shè)清水空白對(duì)照,處理間設(shè)保護(hù)隔離帶?

準(zhǔn)確稱取樣品(土壤?植株?花生仁?花生殼)5.0g于50mL具塞離心管中,加入20mL乙腈,5mL水,浸泡10min,用組織研磨儀振蕩提取15min后,向其中加人3g氣化鈉,再振蕩提取丨5min,于離心機(jī)上以4000r/min離心5min,量取10mL上清液,濃縮至干,用乙腈定容至2.5mL,待凈化?2.3.2凈化將待凈化液轉(zhuǎn)移至10mL離心管(預(yù)先加人200mg無(wú)水MgS04?70mgPSA和15mgGCB)中,渦旋振蕩2min,4000r/min離心5min,取上清液過0.22nm濾膜于2mL進(jìn)樣小瓶,待測(cè)?

相色譜條件feift:AcquityUPLCHSST3(100mmx2.1mm,1.8nm);流動(dòng)相:A相:乙腈;B相:0.1%甲酸水溶液,乙腈+0.1%甲?7jC(90:10,F:F);進(jìn)樣量??1nL;柱溫■_30?<2;流速:0.2mL/min;運(yùn)行時(shí)間:3min?

電離模式:電噴霧正離子ESI(+);毛細(xì)管電壓:1.5kV;離子源溫度:150°C;脫溶劑氣溫度:500°C;脫溶劑氣流量:1000L/h;錐孔反吹氣流量:150L/h;錐孔反吹壓力:7bar;檢測(cè)方式:多反應(yīng)監(jiān)測(cè)掃描模式(multiplereactionmonitoring,MRM);質(zhì)譜采集參數(shù)見表1

2.6膳食暴露風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估

啤?呋酰胺在花生中的膳食暴露風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估分別由公式(1)?(2)計(jì)算得出?國(guó)家估算每日攝人量(nationalestimatesofdailyintake,NEDI):NEDl(mg>=2(STMRixEixPixFi)((riskquotient,RQ):RQ=NEDl/(ADI><bw)(2)式中:Fi=0.0327,為我國(guó)一般人群對(duì)花生的日攝入量,kg;STMRi為規(guī)范殘留試驗(yàn)中值,mg/kg;Ei和Pi分別為食品的4ft部分因子和食品加丨:因子,本文中不考慮區(qū)別,均設(shè)1;ADI為每II允許攝人M,引用我閩閩家相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定,mg/kgbw;bw為體重,kg,我國(guó)人均體S—般按63kg汁?RQ>1時(shí),表示存在不可接受的風(fēng)險(xiǎn),數(shù)值越大,風(fēng)險(xiǎn)越大;RQ<I時(shí),表示風(fēng)險(xiǎn)為可接受,數(shù)值越小,風(fēng)險(xiǎn)越小

芩慮到嗯呋酰胺在乙腈溶液中有較強(qiáng)的溶解性和其在pH值為5￣9時(shí)穩(wěn)定,試驗(yàn)嘗試了乙腈-甲酸水溶液流動(dòng)相體系的多種配比關(guān)系,以調(diào)節(jié)目標(biāo)物峰形?最終發(fā)現(xiàn),在流動(dòng)相屮加人少量甲酸,甲酸的濃度以0.1%為宜,且當(dāng)流動(dòng)相流速為0.20mL/min,流動(dòng)相配比為乙腈+0.1%甲酸水(90:10,時(shí),冃標(biāo)化合物的出峰時(shí)間和峰形均能達(dá)到理想效果試驗(yàn)對(duì)比了氣相色譜電子捕獲檢測(cè)器(H-ECD)和超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀(UPLC/MS/MS)對(duì)試驗(yàn)樣品的影響?結(jié)果發(fā)現(xiàn),檢測(cè)器的選擇對(duì)花生仁樣品的檢測(cè)效果有較大的影響?由圖1￣2可以看出,在同一添加濃度,同一前處理?xiàng)l件[氣相檢測(cè)時(shí),用正己烷+丙酮(95:5,K:F)定容]下,用氣相色譜電子捕獲檢測(cè)器分析,目標(biāo)物附近有很大的雜質(zhì)干擾,即使通過冷藏分離過濾,分析效果依然較差,而當(dāng)使用UPLC/MS/MS,檢測(cè)器的超強(qiáng)選擇性能直接去除基質(zhì)干擾,而且目標(biāo)物峰形尖銳?對(duì)稱?因而本實(shí)驗(yàn)選擇用UPLC/MS/MS作為最終檢測(cè)手段?

試驗(yàn)根據(jù)噻呋酰胺理化性質(zhì)及樣品基質(zhì)特點(diǎn),采用乙腈提取,QuECHERS方法凈化,超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定,建立了噻呋酰胺在花生樣品中簡(jiǎn)便?快速?高靈敏度的電噴霧正離子檢測(cè)方法?噻呋酰胺在花生中各基質(zhì)樣品3個(gè)添加濃度水平下的回收率在75.5%和107.9%之間,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差不大于1〇%?膳食風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估結(jié)果表明,240g/L噻呋酰胺懸浮劑,150￣225ga.i/ha在花生上用藥1?欠,采收間隔期14?21?28d,最大風(fēng)險(xiǎn)商為0.0013,使用安全?該方法測(cè)定結(jié)果重現(xiàn)性好,準(zhǔn)確度?靈敏度和精密度均符合農(nóng)藥殘留分析要求,可用于花生各基質(zhì)樣品中噻呋酰胺殘留t的測(cè)定,亦可為其他樣品中噻呋酰胺殘留A的測(cè)定提供參考?