胰脂肪酶是一種由動物或人類胰腺分泌的水 溶性脂肪分解酶，在甘油三酯的消化中發揮著重要胰脂肪酶是一種由動物或人類胰腺分泌的水 溶性脂肪分解酶，在甘油三酯的消化中發揮著重要發生率的逐年上升，藥物治療成為治療肥胖癥的有 效手段之一。

１ 材料與方法 

１．１ 儀器與軟件 

ＴＵ－１８１０紫外可見分光光 度 計（北 京 普 析 通 用 儀 器 有 限 責 任 公 司）；ＭｕｌｔｉＳｋａｎ ＦＣ酶標儀［賽默飛世爾科技（中國）有限公司］；QL-866渦旋混合器（海門市其林貝爾儀器制造有限公司）；ＤＺＫＷ－４電熱恒溫水浴鍋（北 京 中 興 偉 業 儀器有限 公 司）；ＦＡＩ６０４萬 分 之 一 天 平（上 海 天 平 儀器廠）；ＪＡ５００３Ｂ千分之一天平（上海越平儀器有 限公司）；ＳｉＧｍＡ 高速冷凍離心機（北京五洲東方科 技發 展 有 限 公 司）；Ｂｒａｎｄ 移 液 槍 （德 國 Ｂｒａｎｄ 公 司）；ＫＱ５２００Ｅ超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限 公司）；ＳＴＡＲＴＥＲ２１００ＰＨ 計（深圳市展華儀器儀 表 有 限 公 司 ）；ＧａｓｔｒｏｐｌｕｓＴＭ （Ｖｅｒｓｉｏｎ９．５．０００４ ＳｉｍｕｌａｔｉｏｎｓＰｌｕｓＩｎｃ．，Ｌａｎｃａｓｔｅｒ，ＣＡ，ＵＳＡ）； ＡＤＭＥＴＰｒｅｄｉｃｔｏｒＴＭ軟件（Ｖｅｒｓｉｏｎ８．１．０．０）。 

１．２ 試 劑 

豬 胰 脂 肪 酶 （上 海 源 葉 生 物 有 限 公 司）；對硝基苯基棕櫚酸酯（Ｐ－ＮＰＰ）（≥９８％，阿法埃 莎化學有限公司）；脫氧膽酸鈉（純度：＞９９．０％，上海江萊 生 物 科 技 有 限 公 司）；二 甲 基 亞 砜（ＤＭＳＯ） （北京鼎國昌盛生物技術有限責任公司）；磷酸二氫 鈉、異丙醇、高 氯 酸（北 京 化 工 廠）、氫 氧 化 鈉（天 津 市光復科技發展有限公司）均 為 分 析 純；奧 利 司 他 （純度：≥９８％，中山萬漢醫藥科技有限公司）、新利 司他（純度：≥９８％，上海源葉生物科技有限公司）； 娃哈哈飲用純凈水（杭州集團娃哈哈有限公司）。 

１．３ 方法 

１．３．１ 胰脂肪酶溶液的制備 

精密稱定胰脂肪酶 １００ｍｇ，于 ５０ ｍＬ 離 心 管，加 入 １０ ｍＬ 冷 的 ５０ ｍｍｏｌ·Ｌ－１磷 酸 鹽－５ｍｍｏｌ·Ｌ－１脫 氧 膽 酸 鈉 緩 沖 液 （ｐＨ８．０），３０００ｒ·ｍｉｎ－１渦旋５ｍｉｎ，４ ℃下離心半 徑７．４ｃｍ，７０００ｒ·ｍｉｎ－１離心１０ｍｉｎ，傾出上清液 至一新的離心管，即得。使用時保存在０～６℃冰水 浴環境。 

１．３．２ 胰脂肪酶抑制劑ＩＣ５０的測定 

精密稱取奧 利司他、新 利 司 他 各 １０ ｍｇ 至 于 １０ ｍＬ 量 瓶 中， ＤＭＳＯ 溶解并 定 容，冷 藏 儲 存，使 用 前 取 出 室 溫 融 化，搖勻后以緩沖液稀釋得系列不同濃度的抑制劑 溶液（奧利司他終濃度０～２８８０ｎｍｏｌ·Ｌ－１；新利司 他終濃度０～６１４４ｎｍｏｌ·Ｌ－１）。分別取０．３ｍＬ抑 制劑溶液和上述已制備的酶溶液于試管中，加緩沖 液補至２．７ｍＬ，搖勻，３７ ℃水浴溫孵１５ｍｉｎ，加入 １ｍｍｏｌ·Ｌ－１ｐ－ＮＰＰ底物溶液０．３ｍＬ，３７℃水浴１０ ｍｉｎ后立即于４０５ｎｍ 測定其吸光度，空白以等量不 含抑制劑的 溶 液 代 替，每 組 反 應 平 行３次。ＩＣ５０計 算采用公式（１），其中 Ｋ 為曲線的上限值，ａ為增長 速度，采用三參數ｌｏｇｉｓｔｉｃ曲線擬合求解。

２ 結果

胰脂 肪 酶 作 用 于 Ｐ－ＮＰＰ分解出 對 硝 基 苯 酚 （Ｐ－ＮＰ），該 產 物 在 ４０５ ｎｍ 處有吸收峰，濃度 與 吸 光 值 成 正 比。測 定 奧 利 司他、新利司他在不同濃度條件下與酶反應后的 吸光度，從 而 得 出 其 對 胰 脂 肪 酶 的 抑 制 活 性。奧 利司他、新利司他對胰脂肪酶的抑制考察，隨著抑制劑濃度的增大，抑 制 率 快速增大，最 大 抑 制 率 均 近１００％。采用 公 式（１） 計算得奧利司他的ＩＣ５０為１９．１ｎｍｏｌ·Ｌ－１，新利 司 他的ＩＣ５０為７６ｎｍｏｌ·Ｌ－１。

３ 討論 

奧利司他和新利司他作為強效的胃腸道脂肪 酶抑制劑，是目前公認的用于治療肥胖癥的藥 物。 本研究測定得 奧 利 司 他 的ＩＣ５０為１９．１ｎｍｏｌ·Ｌ－１， 新利司他的ＩＣ５０為７６ｎｍｏｌ·Ｌ－１，均為納摩爾級抑 制。盡 管ＩＣ５０對 評 估 藥 物 對酶的潛在抑制作用有較大的價值，但因其只能反 應藥物－靶標結合的平衡狀態，不能反映整個結合的 動力學過程，且無法預測藥物對酶抑制的快慢和作 用持續的時間等，存在較大局限性使其無法與體內 的藥效活性建立關聯。

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