目前在國內外報道中，對苯二氮卓類安眠藥如 氯硝西泮和非苯二氮卓類如唑吡坦、佐匹克隆、扎 來普隆檢測的報道不少，但對于地洛西泮、尼美 西泮、氯甲西泮、diclazepam 等新型安眠藥的相關 報道很少，而且同時測定上述 10 中安眠藥的方法未 見報道。對于上述新型安眠藥已有的報道，大多是 氣相色譜法（GC）、氣質聯用法（GC/MS）、高效 液相色譜法（HPLC）等。上述這些檢測方法中， HPLC 和 GC 靈敏度低同時都無法對待測樣品進行準確的定性。而 GC/MS 和 HPLC，GC 相比，靈敏 度高，同時能對樣品進行準確定性定量，但是很多 藥物結構相似，無法進行分離，需要對藥物進行衍 生化處理，整個過程較繁瑣；而 HPLC-MS/MS 靈敏 度高、準確度高、檢出限低、可以同時對多種物質 進行定性和定量檢測。

Biotage EXPRESS ABN 固相萃取柱 （60mg/3mL）；ABSCIEX QTRAP 6500 液相色譜 質譜聯用儀，美國 AB 公司；全自動固相萃取儀（拜泰齊貿易上海有限公司）；5430R 離心機，德國 EPPENDORF 公司；VORTEX-5 渦旋混合器，海門其林貝爾公司；微量移液器，德國 EPPENDORF。 Diclazepam(1.0mg/mL)、氟硝西泮（1.0mg/mL)、7- 氨基氯硝西泮（1.0mg/mL)、唑吡坦（1.0mg/mL)、 尼 美 西 泮（1.0mg/mL)、 扎 來 普 隆（1.0mg/mL)、 佐 匹 克 隆（1.0mg/mL)、 氯 硝 西 泮（1.0mg/mL)、 地洛西泮（100µg/mL)、氯甲西泮（1.0mg/mL) 和 Diazepam-D5（100µg/mL)（均購自上海安譜科學儀 器有限公司）。

精密移取各對照品及內標（Diazepam-D5）適量， 分別以甲醇配制成各對照品濃度均為 10μg/mL 的混 合標準溶液和 0.2μg/mL 的內標工作液。

精密移取全血樣品 1mL，加入 50ngDiazepam-D5， 混勻，過固相萃取小柱（ABN 柱），再加入 2mL 水 洗脫，固相萃取小柱盡量吹干后，用1mL甲醇洗脫（除 第一步取血 1mL 外，后續過程由全自動固相萃取儀 完成），取洗脫液 5μL 供 LC-MS/MS 分析。

色譜條件 色譜柱：kinetex 2.6µC18(50m×3.0mm)； 柱溫：30℃；流速：0.4mL/min；進樣量：5µL；流 動相 A：10mmol/L 甲酸銨水溶液；流動相 B：乙 腈； 梯 度 洗 脫 程 序：0~1min，98% A；1~10min，98%~0%A；10~13min，0% A；13~13.1min，0%~98% A； 13.1~15.5min，98% A。

取空白全血添加混合標準溶液，配制成 100ng/ mL 的添加血。按 1.3 方法進行樣品處理，按 1.4 的 色譜和質譜條件進行分析，得到 10 種安眠藥及內標 的總離子流圖，見圖 1，同時選取了部分安眠藥的 MRM 圖，見圖 2。結果表明該方法可將 10 種安眠 藥及內標較好的進行分離，藥物相互之間不影響測 定。

取空白全血添加混合標準溶液，分別配制成 0.1、0.2、0.5、1、2、5、10、25、50、100、250 和 500ng/mL 的添加血。按 1.3 方法進行樣品處理，按 1.4 的色譜和質譜條件進行分析，根據各種安眠藥的 保留時間和碎片離子定性，以色譜峰面積進行定量， 以信噪比 S/N≥3 作為檢出限，以信噪比 S/N≥10 作 為最低定量限，以各被測物濃度為橫坐標，以被測 物與內標峰面積比值為縱坐標，進行加權（W=1/x） 最小二乘法回歸運算。

十種安眠藥中，氯硝西泮、氟硝西泮、7- 氨基 氯硝西泮都屬于第三代鎮靜安眠藥，結構比較相似， 保留時間比較接近，為了能使十種安眠藥能夠完全 分離，綜合分離度、峰形等相關因素，選擇梯度洗 脫程序進行方法研究。十種安眠藥都含有氮原子，在電噴霧離子源（ESI）電離下氮原子易得到一個質 子，形成 [M+H]+ 離子態。因此由理論分析可知在 ESI+ 離子化模式下進行全掃描比在 ESI- 離子模式 下靈敏度更高，因此采用電噴霧離子源（ESI）正離 子模式。在電噴霧離子源（ESI）電離下氮原子易得到一個質 子，形成 [M+H]+ 離子態。因此由理論分析可知在 ESI+ 離子化模式下進行全掃描比在 ESI- 離子模式 下靈敏度更高，因此采用電噴霧離子源（ESI）正離 子模式。